Analize LTT Elispot si CD57+

LTT Elispot

In mai 2011 FDA (Food and Drug Administration) din SUA, impreuna cu CDC ( Centrul pentru preventia si controlul maladiilor ) au aprobat tehnica Elispot® – LTT (T spot). Testul are la baza eliberarea de interferon gamma ( IGRAs ) in testul de transformare limfocitara (LTT).
Nici un alt test de laborator pentru limfocitele T (Melissa® sau ITT ®) nu a obtinut inca aprobarea FDC/CDC.

FDA argumenteaza :
“ … un rezultat pozitiv ( al Elispot LTT ) sugereaza posibilitatea infectiei iar un rezultat negative infirma infectia….”

“ Rezultatele ( Elispot LTT ) se pot obtine in 48 ore ( ITT sau Melissa nu ofera aceasta posibilitate )
Center for Desease Control and Prevention.Updated Guidelines for Using Interferon Gamma Release Assays to Detect Mycobacterium tuberculosis infection .United States . MMWR 2010 ; 59 ( No . RR-5 )
http:/www.cdc.gov/pdf/rr5905.pdf

In conformitate cu acest studiu : 100% specificitate a Borrelia Elispot-LTT

…Sensibilitatea Elispot este estimate la 84 % si specificitatea este de 94 %
…Testul ELISPOT ofera date robuste , reproductibile
…ELISPOT poate fi retestat pentru achizitia de informatii utile in testele de supraveghere
….cele doua teste impreuna ( ELISPOT + CD3-/CD57+ ) se completeaza in incercarea de a intelege imunitatea T-cell mediate in vivo….

Conform acestor studii:
82-100% Specificitate Borrelia Elispot LTT
84 % sensibilitate Borrelia Elispot LTT

Infectia borreliana activeaza in acelasi timp atat raspunsul imun umoral cat si pe cel celular (limfocitele T). Odata ce activitatea bacteriana a incetat , raspunsul imun cellular (limfocit T) nu mai este prezent.

Monitorizarea unui tratament eficient nu se poate baza pe titrul de anticorpi , intrucat acesti anticorpi pot fi detectati in organism chiar si peste ani. In plus in stadiul I al infectiei Lyme (eritemul caracteristic sau “ raceala de vara“) anticorpii pot fi detectati in sange abia dupa cateva saptamani de la infectie iar in unele cazuri niciodata.

Borrelia Elispot LTT elimina aceste probleme . Testul cuantifica activitatea prezenta , de moment a Borreliei burgdorferi atat in infectiile acute cat si in cele cronice. Elispot LTT are o sensibilitate atat de inalta incat poate detecta in sange chiar si activitatea unei singure celule T reactive la Borrelia. Elispot LTT este extrem de util in monitorizarea terapiei pentru boala Lyme acuta si cronica. Elispot LTT ar trebui sa se negativeze la 6-8 saptamani de la incheierea tratamentului adecvat.

Borrelia burgdorferi Elispot LTT

Necesar probe : 3 x 8.5 ml CPDA eprubete- capac galben (nu se centrifugeaza , se pastreaza la temperatura camerei , nu se depoziteaza la rece)

Durata analizei : 2 zile (IMPORTANT: laboratorul are nevoie de aproximativ o saptamana pentru eliberarea rezultatului datorita etapelor pre si post analitice)

Indicatii
1. Diagnosticarea bolii Lyme cronica
2. Diagnosticare bolii Lyme acuta
3. Determinarea duratei de tratament
4. Monitorizarea rezultatelor tratamentului

Lyme Diagnostic va mai ofera Elispot LTT pentru urmatoarele infectii bacteriene / virale :
– Chlamydia pneumonia – Elispot LTT
– Chlamydia trachomatis – Elispot LTT
– Erlichia / Anaplasma – Elispot LTT
– Yersinia – Elispot LTT
– Epstein- Barr –Virus ( EBV ) Elispot LTT
– Cytomegalo Virus Elispot LTT

Bibliografie:
– Lehman PV et al : Unique Strengths of ELISPOT for T cell Diagnostics in Kalyuzhny AE.Handbook of ELISPOT:Methods and Protocols , Methods in Molecular Biology , vol 792. 2nd Ed. Springer ;2012 : 3-23
– Center for Desease Control and Prevention.Updated Guidelines for Using Interferon Gamma Release Assays to Detect Mycobacterium tuberculosis infection .United States . MMWR 2010 ; 59 ( No . RR-5 )
– http:/www.cdc.gov/pdf/rr5905.pdf

CD 57+

Celulele CD 57+ reflecta gradul de activitate al unei infectii Lyme cronice. Numarul lor creste pana la nivelul normal dupa o terapie de success ( aceasta crestere are loc inca din timpul tratamentului sau spre sfarsitul acestuia ).
Progresia infectiei cronice ( stadiul III ) in cazul Borreliozei Lyme duce la o slabire a sistemului imunitar . Aceasta este reflectata prin scaderea numarului de cellule CD 3 – /CD57+ NK . Celulele CD3-CD57+ reprezinta o subpopulatie a celulelor NK (natural killer cells).

Scaderea nivelului CD 57+ indica o infectie cronica Lyme , netratata sau insufficient tratata. Aceste celule nu vor fi niciodata scazute in cazul unei infectii recente.

Diferenta intre boala Lyme cronica si alte boli neurologice este data tocmai de aceasta scadere , care nu apare in Scleroza Multipla , Lupusul Eritematos Diseminat sau Scleroza Laterala Amiotrofica. De asemenea nu exista o variatie a numarului lor in timpul zilei.

CD57+ reprezinta un parametru de laborator extrem de util in diagnosticul si tratamentul Bolii Lyme. Acesta ar trebui lucrat in paralel cu Elispot LTT , cel care reflecta activitatea celulelor T.

Avantajul CD 57+ in diagnosticul Borreliei
1. Rezultate in 5 zile
2. Utilizarea eprubetelor cu heparina standardizata mentine acuratetea masurarii celulelor NK timp de 3 zile

Succesul tratamentului este evidentiat de cresterea semnificativa a numarului de celule CD 57.Rezultatul este util in luarea unei decizii rapide asupra tratamentului, orientand medicul curant asupra extinderii duratei tratamentului sau asupra unei noi abordari a schemei de tratament.

Necesar proba: 1 x 6 ml eprubeta litiu-heparina – capac verde + 1 x 3 ml EDTA K 2 – capac mov (nu se centrifugeaza , se pastreaza la temperatura camerei , nu se depoziteaza la rece)

Durata analizei: 2 zile (IMPORTANT: laboratorul are nevoie de aproximativ o saptamana pentru eliberarea rezultatului datorita etapelor pre si post analitice)
Indicatii
1. Diagnosticarea bolii Lyme cronica
2. Determinarea duratei de tratament
3. Monitorizarea rezultatelor tratamentului

BIBLIOGRAFIE:
– Stricker R.B. Long term decrease in Lymphocyte subset in a patient with chronic Lyme disease. Ann Agric. Environ Med (2002) http://www.lymenet.de/shgs/corryw/Immun-CD57-StatusbeiLB.pdf
– Lyme CD57 Test. http://www.healthcentersofamerica.com/information.cfm?id=144
– Stricker R.B. Winger EE. Decreased CD57 lymphocyte subset in patients with chronic Lyme disease. Immunol Lett 1, 76 (1) (2001) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11222912